蓝靛果忍冬E8离体快繁无菌体系建立分析

2019-06-11 03:10:30 吉林农业2019年6期

王瑞琦 李金英 赵春莉 刘子平 潘珠峰

摘要:本文以吉林农业大学小浆果基地引进的蓝靛果忍冬优良?#20998;諩8为研究对象,从外植体的消毒、基本培养基、不同激素等方面进行了离体组织培养研究,旨在探求最适合蓝靛果忍冬组培苗离体快繁的条件,从而筛选出最利于蓝靛果忍冬组培苗扩大繁?#36710;?#22521;养基配方,从而实现大量优质?#32622;?#24555;速繁殖,为保存种?#39318;试春?#35268;模化生产奠定基础。

关键词:蓝靛果忍冬E8;组织培养;离体快繁体系

基金项目:吉林省大学生创新创业训练计划项目——蓝靛果忍冬种?#39318;试?#31163;体快繁研究;吉林省教育厅资助项目——长白山野生蓝靛果忍冬资源优良?#20998;?#36873;育及配套栽培技术研究(合同编号:JJKH20180667KJ)

中图分类号: S663 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文献标识码: ?A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI编号: ? 10.14025/j.cnki.jlny.2019.06.013

蓝靛果忍冬(Loniceraedulis)又名羊奶子、黑瞎子果、山茄子等,其营养丰富,不仅可?#32654;?#40092;食、加工,还?#21830;?#21462;色素,是一种珍稀的浆果资源[1,2]。另外,其嫩枝可入药,清热解毒,果实富含药用保健成分,具有极高的药用价值。因其利用价值?#27597;擼?#25925;?#23567;?#31532;三代水果”之称,应用前景较好。但对蓝靛果忍冬的探究多集中在营养保健及栽培等方面上[3,4]。而关于蓝靛果忍冬离体快繁方面的报道较少,而该?#21442;?#23454;生繁殖较困難,扦插繁殖亦受外界因素影响较大,所以利用?#21442;?#32452;织培养技术进行离体快繁是?#34892;?#30340;繁育?#32622;?#36884;径。本试验对蓝靛果忍冬E8进行了?#21442;?#32452;织培养研究,最终建立了无菌快速繁殖体系。

1材料与方法

1.1初代无菌苗的获得

将吉林农业大学果树基地引进的蓝靛果忍冬优良?#20998;諩8半木质化的枝条先进行表面清洗除尘除菌处理,然后将其置于超净工作台上,用0.1%的升汞溶?#33322;?#34892;不同时间的消毒,最后无菌水冲洗至少3次以?#31232;?#20877;用无菌滤纸吸去表面水分,在无菌纸上将外植体剪截的长度范围是1.5~2cm,接种于事先配制好的,pH值为5.8的MS培养基中(BA2.0mg/L、IBA0.1mg/L,蔗糖和琼脂分别为30g/L和8g/L)。试验设10个处理,?#31185;?#20869;含1个外植体,1个月前后调查统计培养物生长状况,例如污染、死亡?#32479;?#27963;等方面。

1.2 增殖继代培养

本试验设10瓶为一个处理,外植体?#31185;?#25509;入3个,1个月前后统计污染、增殖及成活。筛选适?#35828;?#22522;本培养基种类试验中,Murashig and Skoog Medium(MS)、1/2Murashig and Skoog Medium(1/2 MS)、GamborgB5 Medium(B5)、CHU (N6) Medium(N6),激素为2.0mg/L-16-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和0.1 mg/L吲哚丁酸(IBA);不同生长素对组培苗增?#36710;?#25506;?#31181;校琈S中加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤,与不同浓度(0.05、0.1、0.2mg/L)的吲哚丁酸、萘?#23452;幔∟AA)、吲哚?#23452;幔↖AA)形成处理组合;在含有6-苄氨基腺嘌呤2.0mg/L及0.2mg/L吲哚丁酸的MS中,添加不同浓?#20154;?#24179;(0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L)的赤霉素(GA3)。

1.3生根培养

每个处理接种10瓶,?#31185;?#25509;种1~2个无根组培苗,30d左右观察记录组培苗生根率及根生长情况等指标。基本培养基筛选种类设为1/2MS、MS、B5、N6,添加IBA0.6mg/L。不同激素筛选种类设为NAA、IAA和IBA,浓度设为0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L。

1.4培养条件

培养室环?#36710;?#28201;度为(25±1)℃,光照的时间为12h/d,光照强度2000 Lx左右。

2 结果与分析

2.1 E8初代无菌苗的获得

外植体消毒时间长短对无菌苗的获得影响差异较大。时间过短(4~6min),外植体污染率较高。培养过程中发现?#21512;?#27602;时间与污染?#39135;矢合?#20851;,但与死亡?#39135;收?#30456;关。因此,时间要长短适宜才能成功获得初代培养物。带顶芽嫩梢消毒8min、无顶芽茎段10min较好。

2.2 E8组培苗的增殖

研究发现,B5和N6不适于组培苗的增殖,而在1/2MS培养基中的总体状况稍好,而组培苗在MS培养基中增殖和生长状况最优。

不同激素对组培苗增?#36710;?#24433;响存在差异。NAA利于愈伤组织形成,而对组培苗的进一步分化增殖极为不利。从增殖倍数与长势两方面综合考虑,IAA的适宜浓度是0.1mg/L。IBA对增?#31216;?#21040;的促进作用相对较明显。

在分析GA3对组培苗增殖影响的结果时显示,当GA3的浓度为0.40mg/L时,其增殖倍数较高,芽苗总体长?#24179;?#20248;。因此,E8组培苗适?#35828;?#22686;殖配方为MS培养基中添加适宜浓度的赤霉素(0.4mg/L)、6-BA(2.0mg/L)和IBA(0.2mg/L)。

2.3 E8组培苗瓶内生根

在1/2MS培养基中的组培苗生根效果最好,在MS和B5培养基中生根效果欠佳,而在N6中表现最差。组培苗在含有不同浓度NAA中的总体表现是苗基部形成愈伤组织,不利于生根培养,吲哚?#23452;?#23545;各种质的组培苗生根诱导起到了一定积极影响,但生根率相对低些,IBA浓度为1.0mg/L时,生根率可达100%,因此,生根诱导培养的适宜条件为1/2MS培养基+1.0mg/L IBA。

3结论

本研究经过近一年的试验,成功建立了蓝靛果忍冬E8的离体快速繁殖体系,该试验结果可为蓝靛果忍冬优良?#20998;?#24037;厂化快速繁育优质?#32622;?#25552;供科学参考。

参考文献

[1]刘丽华,姜兴明.长白山区蓝靛果经济林的营造技术[J].国土绿化,2014(07):39.

[2]田新华,吴捷,张建瑛,等.蓝靛果忍冬组织培养研究[J].林业科技,2012,37(06):7-9.

[3]周丽萍,王化,李梦莎,等.蓝靛果保健功能研究进展[J].国土与自然资源研究,2016(05):92-95.

[4]王柏林.蓝靛果丰产栽培技术[J].农村实用科技信息,2014(11):7.

作者简介:王瑞琦,本科生在读,研究方向:果树栽培。

通讯作者:李金英,博士,讲师,研究方向:?#21442;?#32452;织培养及资源。

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