油茶种子角鲨烯检测方法的建立与不同种质含量分析

2019-06-11 03:10:30 吉林农业2019年6期

摘要:本实验采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)的方法测定油茶种子中角鲨烯含量。样品经液氮研磨后,利用正己烷提取脂溶性成分,再经甲酯化反应后用正己烷定容,气相色谱质谱联用仪检测,外标法定量。结果表明:角鲨烯标准品在50~300 ug/mL范围内与峰面积线性关系?#24049;茫琑2=0.9944,不同种质油茶种子角鲨烯含量差异明显(100~800 ug/g)。采用GC-MS法前处理方法简单,灵敏度高,数据准确可靠,测定的不同油茶种质种子中的角鲨烯含量,为开发木本油料新利用方向以及高角鲨烯油茶品种的选育提供依据。

关键词:油茶;种子;气相色谱联用质谱;角鲨烯

中图分类号: TS227 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文献标识码: ?A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI编号: ? 10.14025/j.cnki.jlny.2019.06.016

角鲨烯是一种脂质三萜类化物,可溶解于异丙醇、石油?#36873;?#19993;酮,不溶于水,在常压下330 ℃分解[1]。角鲨烯作为所有固醇类物质的全合成前体,具有抗氧化、调节胆固醇代谢、降血糖、细胞保护、抗肿瘤等生物活性[2]。由于其?#24049;?#30340;生物活性,在?#31216;貳?#21307;药、化妆品等领域被广泛应用,但角鲨烯的来源较为单一,目前主要是?#30001;?#28023;鲨鱼甘油中提取。随着人们环保意识?#25237;?#37326;生动物保护意识的增强,寻?#28082;鲜?#30340;角鲨烯替代来源变得十分迫?#23567;?#30446;前发现角鲨烯的替代来源主要以?#21442;?#20026;主,油料作物如橄榄油、茶油、棕榈油等油脂中含有一定浓度的角鲨烯。本实验结果可应用于油茶种子和油脂中角鲨烯的日常分析,旨在发现角鲨烯含量较高的油茶品种,为开发木本油料新利用方向及高角鲨烯含量品种的选育提供方法依据。

1 材料与方法

1.1 油茶材料

采自贵州省铜仁玉屏侗族自治县油茶产业示范园种质圃。

1.1.1 实验设备与药品 ?气相色谱串联质谱仪(Clarus680型 美国PerkinElmer)。

1.1.2 试药 角鲨烯标准品:99.5%,中国药品生物制品检定所。

1.2 实验方法

1.2.1 標准曲线绘制 精确称取角鲨烯标准品,正己烷定容,配置成50ug/ml、100ug/ml、150ug/ml、200ug/ml、250ug/ml、300ug/ml标准品溶液。

1.2.2 样品前处理 精确取油茶籽0.5g,液氮研磨至粉末状,加入200μl正己烷和500μl氢氧化钾-甲醇(1 mol/L)溶液,震荡3~5min,密封后放入60℃水浴30min,待冷却后加入1ml三氟化硼甲醇溶液,60℃水浴30min,取出小瓶,待液体冷却后加入1ml饱和氯化钠和1ml正己烷,剧?#33402;?#33633;1min。待静置分层后取上层液体入新的离心管中,加入1/10无水硫酸钠,震荡干燥,最后将提取液用正己烷定容至5ml,过膜0.22μm滤膜待测。

1.2.3 GC-MS条件 采用EI离子源,气相色?#23383;鵇B-23(60 m×0.25mm×0.25μm),进口温度:230℃,传输线温度215℃;升温条件:起始温度50℃,10min升至200℃,维持200℃ 28min后,2min升至220℃,并保持3min。

2 结果与分析

2.1 角鲨烯标准品GC-MS标准曲线

以标准溶液为横坐标,?#26434;?#23792;面积为纵坐标?#35889;?#26631;准曲线。如图1所示,当角鲨烯浓度为50 ~300 μg/mL范围内,其线性回归方程Y=533.57x-3523.7,线性相关系数R2=0.9944。

2.2 ?#23548;?#26679;品测定

采用1.2.2所示样品前处理方式与1.2.3所示的色谱条件进行?#23548;?#26679;品测定,通过分析角鲨烯含量测定结果发现,42个不同品系油茶种子含量差异明显,样品MY027、MY062、MY101中角鲨烯的含量明显高于其他检测样品,分别高达772.57μg/g,728.70μg/g,700.35μg/g,平均可达733.4μg/g,样品MY090、MY083、MY097、MY068、MY086、MY089、MY082的角鲨烯含量在500~650μg/g,平均可达561.61 μg/g,标准差比都在7%内,精密度好,数据可信度高。

3 结论

本实验建立了正己烷提取——甲酯化反应——气质联用测定多种样?#20998;?#35282;鲨烯含量的外标法定量的测试方法,本方法较为简单、定量准确、精密度高。利用此法对42种油茶种子样品的角鲨烯含量进行检测,可以准确得出样?#20998;?#30340;角鲨烯含量,明确体现出角鲨烯含量较高的品种,为油茶高角鲨烯品种的选育提供依据,并为木本油料的开发提供了新的利用方向。

参考文献

[1]吴梧桐.生物制药工艺学[M].?#26412;?#20013;国医药科技出版社, 1993.

[2]张光杰,杨利玲,等.角鲨烯开发及应用研究进展[J].粮食与油脂, 2017,12(30):7-10.

作者简介:刘文浩,大专学历,工程师,研究方向:森林培育、木本油料种质资源选育。

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